style="width:1.94669in;height:0.57332in" /> ………………………… (1) 本文是学习GB-T 17814-2011 饲料中丁基羟基茴香醚、二丁基羟基甲苯、乙氧喹和没食子酸丙酯的测定. 而整理的学习笔记,分享出来希望更多人受益,如果存在侵权请及时联系我们
本标准规定了饲料中丁基羟基茴香醚(BHA)、 二丁基羟基甲苯(BHT)、 乙氧喹(EQ)
和没食子酸丙 酯(PG) 的高效液相色谱测定方法和饲料中丁基羟基茴香醚(BHA)、
二丁基羟基甲苯(BHT)、 乙氧喹
(EQ) 的气相色谱测定方法。
本标准高效液相色谱测定方法适用于配合饲料、复合预混合饲料、浓缩饲料、鱼粉和骨粉中丁基羟
基茴香醚(BHA)、 二丁基羟基甲苯(BHT)、 乙氧喹(EQ) 和没食子酸丙酯(PG)
含量的测定；气相色谱测 定方法适用于配合饲料、鱼粉中丁基羟基茴香醚(BHA)、
二丁基羟基甲苯(BHT) 和乙氧喹(EQ) 含量的
测定。
高效液相色谱测定方法的检出限为：丁基羟基茴香醚(BHA)1.1
mg/kg、二丁基羟基甲苯(BHT)
1.6 mg/kg、乙氧喹(EQ)1.8 mg/kg、没食子酸丙酯(PG)1.3
mg/kg;定量限为：丁基羟基茴香醚
(BHA)5.6 mg/kg、二丁基羟基甲苯(BHT)8.0 mg/kg、乙氧喹(EQ)8.8
mg/kg、没食子酸丙酯(PG)
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件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。
GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法
GB/T 14699.1 饲料 采样
GB/T 20195 动物饲料 试样的制备
高效液相色谱法：用乙腈超声提取试样中BHA、BHT、EQ 和 PG,
提取液经有机相针式滤器过滤，
滤液经0.22 μm
有机滤膜过滤，滤液经反相柱的高效液相色谱仪分离，紫外检测器检测，外标法定量。
气相色谱法：试样中 BHA、BHT 和 EQ
用正已烷提取，离心分离后(如遇干扰待测组分的样品，则
需取上清液，用柱层析净化处理),取上清液用气相色谱、FID
检测器检测，外标法定量。
本标准所用试剂和水，未注明其要求时，均指分析纯和符合 GB/T 6682
中规定的三级水。色谱分
析中所用水均为符合 GB/T6682 中规定的一级用水。
4.1 第一法 高效液相色谱法(仲裁法)
4.1.1.1 乙腈：色谱纯。
GB/T 17814—2011
4.1.1.2
4.1.1.3
4.1.1.4
4.1.1.5
4.1.1.6
4.1.1.7
4.1.1.8
0.0001g,
乙酸 。
乙酸溶液(2%):量取20.0 mL 乙酸(4. 1. 1.2),用水稀释至1000 mL,
摇匀，即得。
丁基羟基茴香醚标准品(BHA): 含量≥96 .0%。
二丁基羟基甲苯标准品(BHT): 含量≥96 .0%。
乙氧喹标准品(EQ): 含量≥96 .0%。
没食子酸丙酯标准品(PG): 含量≥96.0%。
混合标准储备液：分别称取 BHA(4.1.1.4)、BHT(4.1.1.5)、EQ(4.1.1.6)0.250
g(精确至
视其含量，换算成100%再称样)和 PG(4.1.1.7)0.125 g(精确至0 . 0001 g,
视其含量，换算
成100%再称样),置250 mL
棕色容量瓶中，用乙腈(4.1.1.1)溶解，定容至刻度，摇匀；精密量取该液
20.00 mL,置200 mL 棕色容量瓶中，用乙腈(4.1.1.1)定容至刻度，摇匀。使 PG
浓度为0.05 mg/mL,
BHA、BHT、EQ 浓度为0 . 1 mg/mL, 贮存于4℃冰箱中，有效期为2周。
4.1.1.9
混合标准工作液：分别精密量取混合标准储备液(4.1.1.8)0.50 mL,2.00 mL,4.00
mL, 8.00 mL,16.00 mL,20.00 mL,25.00 mL置 5 0 mL
棕色容量瓶中，用乙腈定容至刻度，摇匀，配制成 PG 为0.50
μg/mL,2.00μg/mL,4.00μg/mL,8.00 μg/mL,16.0μg/mL,20.0 μg/mL 和25.0 μg/mL
标准工作液，BHA、BHT、EQ 为1 . 00μg/mL,4.00 μg/mL,8.00μg/mL,16.0
μg/mL,32.0 μg/mL, 40.0μg/mL 和50 . 0μg/mL 标准工作液。临用现配。
4.1.2.1 实验室常用仪器设备。
4.1.2.2 分析天平：感量为0.0001 g。
4.1.2.3 具塞三角瓶：250 mL
4.1.2.4 超声波清洗器。
4.1.2.5 一次性注射器：10 mL。
4.1.2.6 有机相针式滤器：直径25 mm, 孔径0.45 μm。
4.1.2.7 微孔滤膜：有机相，孔径0.22 μm。
4.1.2.8
高效液相色谱仪：配有紫外检测器或二级管阵列检测器。
按 GB/T 14699.1采样，按GB/T 20195制备试样，磨碎，通过0.45 mm
孔筛，混匀，装入密闭容器
中，避光低温保存备用。
4.1.4.1 试样溶液制备
称取试样2 g～5 g(精确至0 . 0001 g), 置250 mL 具塞三角瓶(4.
4.1.1.1 中，精密加入乙腈 ([4.1.1.1](https://4.1.1.1
摇匀，置超声波清洗器(4.1.2.4)中提取40 min, 在提取过程中振摇2次～3次。
4.1.2.5
mL, 用有机相针式滤器(4.1.2.6)
过滤，滤液经0.22 μm
微孔滤膜(4.1.2.7)滤过，滤液作为试样溶液，供液相色谱测定。
4.1.4.2 测定
4.1.4.2.1 液相色谱参考条件
色谱柱：Ci₈ 柱，长150 mm, 内径3 . 9 mm, 粒 径 5 μm, 或性能相当者；
柱温：室温；
GB/T 17814—2011
流动相：乙腈(4.1.1.1)+乙酸溶液(4.1.1.3)=68+32(体积比);
流速：0.5 mL/min;
检测波长：280 nm;
进样量：20μL;
色谱图：参见附录 A。
4.1.4.2.2 标准曲线绘制
按液相色谱参考条件(4.1.4.2.1),向基线平稳的高效液相色谱仪(4.1.2.8)连续注入混合标准工
作液(4.1.1.9),浓度由低到高，以浓度为横坐标，峰面积为纵坐标作图，得到标准曲线回归方程。
4.1.4.2.3 定量测定
注入试样溶液(4.1.4.1),其中PG 、BHA 、EQ 和 BHT
的峰面积响应值应在标准曲线线性范围内，
超过线性范围则应稀释后再进行分析。依峰面积，从标准曲线中得到试样溶液(4.1.4.1)中
PG 、BHA、
EQ 或 BHT 的浓度。
4.1.4.2.4 结果计算
试样中 PG 、BHA 、EQ 和 BHT 的含量 X,
以质量分数表示，单位为毫克每千克(mg/kg), 按式(1)
计算。
style="width:1.94669in;height:0.57332in" /> ………………………… (1)
式中：
c— 由标准曲线而得的试样液中 PG、BHA、EQ 或 BHT
的浓度，单位为微克每毫升(μg/mL);
V—— 试样定容体积，单位毫升(mL);
D—— 试样稀释倍数；
m 试样质量，单位为克(g)。
4.1.4.2.5 结果表述
测定结果用平行测定的算术平均值表示，保留到小数点后一位。
在重复性条件下，同一分析者对同一试样同时两次平行测定所得结果的绝对差值不得超过算术平
均值的10%。
注：检测全过程，尽可能避光(或不在强光下)操作，以减少损失。
4.2.1.1 正己烷。
4.2.1.2 丙酮。
4.2.1.3 二氯甲烷。
4.2.1.4 二氯甲烷-丙酮混合液：9+1,体积比。
4.2.1.5 无水硫酸钠：500℃烘4 h。
4.2.1.6 氟罗里硅土：孔径177 μm～149μm(80
目～100目),550℃烘4 h, 存于干燥器中。
GB/T 17814—2011
4.2.1.7 助滤剂：Celite545,20 μm～45 μm。
4.2.1.8 医用脱脂棉。
4.2.1.9 混合标准溶液：分别称取
BHA(4.1.1.4)、BHT(4.1.1.5)、EQ(4.1.1.6)0.5 g(精确至 0.0001g,
视其含量，换算成100%再称样),置于50 mL
棕色容量瓶中，以正已烷(4.2.1.1)溶解并定 容。此液为10mg/mL。
然后稀释成系列标准液：1.00 mg/mL,0.50 mg/mL,0.10 mg/mL,0.05 mg/mL, 0.01
mg/mL。
4.2.2.1 气相色谱仪：配置氢火焰离子化检测器(FID
4.2.2.2 氮气钢瓶：氮气纯度为99 .99%。
4.2.2.3 氢气发生器：氢气纯度为99 .99%。
4.2.2.4 空气钢瓶： 一般压缩空气。
4.2.2.5 离心机：4000 r/min。
4.2.2.6 粉碎机：粉碎粒度达380 μm(40 目
4.2.2.7 超声波处理机。
4.2.2.8 微型混合器。
4.2.2.9 分析天平：感量0.0001 g。
4.2.2.10 具塞刻度玻璃试管：10 mL。
4.2.2.11 铝制试管架。
4.2.2.12 具活塞层析柱：15 cm×φ1 cm。
4.2.2.13 旋转蒸发器：带抽真空装置(或真空泵
4.2.2.14 浓缩烧瓶：150 mL, 带 5 mL 刻度尾接管。
按 GB/T 14699.1采样，按 GB/T 20195 制备试样，磨碎，通过0.45 mm
孔筛，混匀，装入密闭容器
中，避光低温保存备用。
4.2.4.1 试样溶液制备
4.2.4.1.1 提取
称取试样2 g(精确至0.0001 g)于10 mL
具塞刻度试管中，加入少许无水硫酸钠(4.2.1.5),再加 5.0mL
正己烷(4.2.1.1),加塞。在微型混合器(4.2.2.8)上混合0.5 min,
将试管放到试管架上，连同
4.2.2.7
15 min。 取出，将试管外水液擦去，放入离心机(4.2.2.5),以4000 r/min 离心2
min,取出试管。上清
液为待测溶液。
注1:如遇较难提取的试样，可于前一天称样，加正已烷浸泡过夜，第二天再提取测定。
注2:也适合于维生素预混料、单组分抗氧化剂 BHA、BHT、EQ
的测定，而且可免除程序升温，节省时间。
4.2.4.1.2 净化
4.2.4.1.2.1
如遇干扰待测组分的样品，须作如下柱层析净化处理：首先按4.2.4. 1.
1提取样品，只是
提取液由5 . 0 mL 正己烷(4.2. 1. 1)改为10.0 mL 正己烷(4.2. 1. 1)。
注：本方法是以程序升温去除色谱图后面可能出现的杂质峰(避免干扰后续上机样品的测定)。如色谱图中，前面
GB/T 17814—2011
各待测组分不受杂峰干扰，则尽可不必采用净化处理，避繁求简。但要常注意清洗进样器。
4.2.4.1.2.2
装柱：层析柱(4.2.2.12)底先放少许脱脂棉(4.2.1.8),再加少许(约2 g)
无水硫酸钠 (4.2.1.5),用正己烷(4.2.1.1)调制氟罗里硅土(4.2.1.6)适量(约4
g, 以装满柱为准),湿法填充于层
4.2.2.12
助滤剂(4.2.1.7),再加约5 g 无水硫酸钠(4.2.1.5),铺平。
注：如用柱层析净化时， 一定要注意氟罗里硅土的活性。550℃烘4 h
能保持3d,3d 后，用前需在130℃烘4 h(特
别是夏天湿度大时，更需注意);活性太强，EQ
过柱洗脱不下来时，可加分析用水脱活(加氟罗里硅土质量的
2%的水，摇匀，过夜平衡)。
4.2.4.1.2.3 淋洗：用移液管准确吸取4.2.4.1.2.1所得上清液5.0 mL
上柱。先以30 mL 正已烷 (4.2.1.1)淋洗，再以80 mL
二氯甲烷-丙酮混合液(4.2.1.4)淋洗，速度以大约每分钟2 mL 为宜。用
4.2.2.13
用正己烷(4.2.1.1)定容至2.0 mL, 待测。
4.2.4.2 测定
4.2.4.2.1 气相色谱参考条件
4.2.4.2.1.1 毛细管柱法
色谱柱：HP- 1 石英毛细管柱，25 m×φ0.32 mm。
载气：氮气：2.0 mL/min; 尾吹气：30 mL/min; 氢气：30 mL/min; 空气：350
mL/min。
隔垫吹扫：6 mL/min。
分流比：20:1。
检测器温度：240℃。
进样口温度：210℃。
柱温：参见附录 B。
色谱图：参见附录 C。
4.2.4.2.1.2 填充柱法
色谱柱：5%SE-30 玻璃填充柱，2.5 m×3.5 mm。
气体流速：氮气：40 mL/min; 氢气：25 mL/min; 空气：250 mL/min。
进样口、检测器温度：230℃。
柱温：参见附录 B。
色谱图：参见附录 C。
4.2.4.2.2 定量测定
分别取系列混合标准溶液(4.2.1.9)1 μL 进样，测得不同浓度 BHA 、BHT 、EQ
的峰面积(或峰
高),以浓度为横坐标，峰面积(或峰高)为纵坐标，分别绘制工作曲线。同时取试样溶液(4.2.4.1)1μL
进样，测得峰面积〔或峰高〕分别与工作曲线相比较定量，按式(2)或式(3)计算求得。
4.2.4.2.3 结果计算
试样中BHA 、EQ 和 BHT 的含量 X₂,
以质量分数表示，单位为毫克每千克(mg/kg), 按式(2)
计算。
style="width:2.31327in;height:0.61996in" /> ………………………… ( 2)
式中：
A 、— 进样样液中BHA 、BHT 、EQ 峰面积或峰高，单位为微伏 ·秒或毫米(μV ·
s 或 mm);
GB/T 17814—2011
m,—BHA 、BHT 、EQ 标准品进样的绝对量，单位为纳克(ng);
V — 样品提取定容体积，单位为毫升(mL);
A 、— 标准液的 BHA 、BHT 、EQ 峰面积或峰高，单位为微伏 · 秒或毫米(μV ·
s 或 mm);
m — 称样量，单位为克(g);
V; 样液的进样体积，单位为微升(μL)。
如样品用柱层析净化处理，试样中 BHA 、EQ 和 BHT 的含量 X₃,
以质量分数表示，单位为毫克每
千克(mg/kg), 按式(3)计算。
style="width:2.95991in;height:0.61996in" /> ………………………… (3)
式中：
V₂— 样液进样前定容体积，单位为毫升(mL);
Vi— 样品提取液分取过柱体积，单位为毫升(mL)。
4.2.4.2.4 结果表述
测定结果用平行测定的算术平均值表示，保留到小数点后一位。
在重复性条件下，同一分析者对同一试样同时两次平行测定所得结果的绝对差值不得超过算术平
均 值 的 1 5 % 。
GB/T 17814—2011
(资料性附录)
丁基羟基茴香醚、二丁基羟基甲苯、乙氧喹和没食子酸丙酯标准品的高效液相色谱色谱图
丁基羟基茴香醚、二丁基羟基甲苯、乙氧喹和没食子酸丙酯标准品的高效液相色谱图见图
A.1。
style="width:10.85993in;height:6.7001in" />
min
1——没食子酸丙酯；
2——丁基羟基茴香醚；
4——二丁基羟基甲苯。
图 A.1 标准溶液的高效液相色谱图
GB/T 17814—2011
(资料性附录)
气相色谱法的程序升温图
B.1 毛细管柱的程序升温图见图B.1。
style="width:6.66008in;height:3.5134in" />200℃
150
图 B.1 毛细管柱的程序升温图
B.2 填充柱的程序升温图见图B.2。
style="width:6.00667in;height:3.9666in" />25{/min
170℃
图 B.2 填充柱的程序升温图
GB/T 17814—2011
(资料性附录)
丁基羟基茴香醚、二丁基羟基甲苯和乙氧喹标准品的气相色谱图
C.1 丁基羟基茴香醚、二丁基羟基甲苯和乙氧喹标准品的毛细管柱气相色谱图见图
C.1。
style="width:3.11389in;height:9.17361in" />
2——二丁基羟基甲苯；
图 C.1
丁基羟基茴香醚、二丁基羟基甲苯和乙氧喹标准品的毛细管柱气相色谱图
GB/T 17814—2011
C.2 丁基羟基茴香醚、二丁基羟基甲苯、乙氧喹标准品的填充柱气相色谱图见图
C.2。
style="width:5.20002in;height:11.0935in" />
1——丁基羟基茴香醚；
2——二丁基羟基甲苯；
图 C.2
丁基羟基茴香醚、二丁基羟基甲苯和乙氧喹标准品的填充柱气相色谱图
style="width:4.16005in;height:1.85328in" />
中 华 人 民 共 和 国
国 家 标 准
饲料中丁基羟基茴香醚、二丁基羟基甲苯、
乙氧喹和没食子酸丙酯的测定
GB/T 17814—2011
关
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网址：www.gb168.cn
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2012年4月第一版
关
书号：155066 ·1-44374
版权专有 侵权必究
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